Tampon Çözelti Hazırlanması

Makale Sayfaları
Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 1.10-3.50  Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 1.10-4.96 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 2.20-3.80 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 4.00-6.20 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 4.96-6.69 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH 4.80-8.00 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH  7.71-9.23 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH  9.23-11.02 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
pH  8.53-12.90 Aralığında Tampon Çözelti Hazırlanması
Değişik Derişimlerde Tampon Hazırlanması
Biyolojik Tampon Çözeltileri

05. Biyolojik Tampon Çözeltileri
Çift yüklü tamponların, biyolojik moleküllerle uyumu, Good ve arkadaşları tarafından  çeşitli çalışmalarla kanıtlanmıştır.'Good'  tampon çözeltilerinin, fosfat-, tris-, borat- ve karbonat- tamponlarına göre avantajları fazladır. Bu avantajlar; 

• pKα değerlerinin pH 6.0 ve 9.0 arasında olması,
• pKα değerlerinin sıcaklık ve derişimden bağımsız olmasıdır.

Bütün bu bileşikler kimyasal olarak kararlıdır, toksik değildir ve biyokimyasal reaksiyonlarda girişim yapmazlar. Hücre membranından absorbe edilmediğinden dolayı hücre gelişimi amacıyla kullanıma uygundur. Aynı zamanda 240-700 nm dalgaboyu arasındaki absorpsiyonu da minimum düzeydedir. 
05.01. Tampon Çözelti Hazırlarken Dikkat Edilecek Kurallar 
Bir tampon çözeltinin yaklaşık %99'unu su oluşturmaktadır. Bu nedenle kullanılan suyun kalitesi ve güvenilirliği çok önemlidir. Kullanılacak suyun çift destile olması ve kullanılmadan önce ultrafiltre edilmesi tavsiye edilir. 
Deney sırasında kullanılacak olan tampon çözeltinin sıcaklığı ve konsantrasyonu not edilmeli, daha sonraki denemelerde de aynı parametrelerin geçerli olduğundan emin olunmalı. Stok çözelti ile çalışırken, mutlaka çözelti seyreltildikten ve sıcaklık ayarlaması yapıldıktan sonra pH'sı  ayarlanmadır. Stok çözeltilerde gözle görülebilen bir bulanıklık olup oladığına dikkat edilmelidir. Bu bulanıklık bir mikrobiyal kontaminasyon veya ortamdaki tuzların çökmesi sonucunda oluşabilir. Çözeltiler serin bir yerde ve ağzı sıkıca kapatılarak muhafaza edilmelidir. 
Seçilecek tamponun pKα değeri çalışma pH değerine yakın olmalıdır. Deney süresince pH nın düşeceği düşünülüyorsa pKα değeri çalışma pH değerinin çok az altında olan bir tampon seçilmedir. pH nın artacağı düşünülüyorsa bu sefer tam tersi durum söz konusudur (tamponun pKα sı çalışma pH değerinin biraz üzerinde). 
Bazı durumlarda biyolojik sistemler üzerine, örneğin sodyum yada potasyum iyonlarının etkisini kontrol etmek için mineral katyonları içermeyen tamponların hazırlanması gerekli olabilir. Bu durumda pH değerinin ayarlanmasında NaOH veya KOH yerine quarterner organik tetrametilamonyum hidroksit çözeltisi kullanılabilir.  
Fosfat Tamponları 
Fosfat tamponu ideal bir tampon olup bir çok uygulamada kullanılmaktadır. Ancak aktif bir bileşen olduğu için birçok  biyolojik reaksiyonlarda inhibitör, metabolit, aktivatör olarak etki etmesi olumsuzluk yaratır. Çok değerlikli katyonları bağlar veya çöktürür. Tamponlama kapasitesi, literatürde bir çok çalışmada pH 5.8-8.0 aralığında gösterilmesine karşın, pH 7.5'un  altında zayıftır (Sørensen, S.P.L.: Biochem Z. 21, 131 (1909) and Biochem. Z. 22, 352 (1909)). 
05.02. Good Tampon Kimyasalları
 
ACES  Merck Kat No 1.15226

Cas No	7365-82-4	N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid
EINECS No	230-908-4
Formül	C4H10N2O4S
Molar ağırlık	182.20 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez.
pKα	6.90 (20°C)
d pKα/dT	-0.02/°C
Uygulama notları	ACES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. 260 ve 280 nm de düşük UV absorbansına sahiptir. Proteinlerin kromatografik saflaştırmasında elüsyon tamponu olarak kullanılır. Cu+2 metalini bağlar. Mg+2,Ca+2 ve Mn+2  metalini bağlamaz.
Tampon aralığı	pH 6.1-7.6
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2 g madde 50 mL iki kere destile edilmiş saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
ADA  Merck Kat No 1.15227

Cas No	26239-55-4	N-(2-Acetamido)iminodiacetic acid
EINECS No	247-530-0
Formül	C6H10N2O5
Molar ağırlık	190.16 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	6.60 (20°C)
d pKα/dT	-0.011/°C
Uygulama notları	ADA, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir.Biyolojik uygulamalarda minimum girişim gösterir fakat metal iyonlarını bağlama kapasitesine sahiptir.
Tampon aralığı	pH 5.9-7.3
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 0.5 g madde 100 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

BES  Merck Kat No 1.15228

Cas No	10191-18-1	N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethane sulfonic acid
EINECS No	233-465-5
Formül	C6H15NO5S
Molar ağırlık	213.25 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	7.15 (20°C)
d pKα/dT	-0.016/°C
Uygulama notları	BES 260 ve 280 nm'de düşük absorpsiyon gösterir. Sadece Cu+2 katyonunu  bağlar, Mg+2,Ca+2 ve Mn+2 katyonlarını bağlamaz.
Tampon aralığı	pH 6.4-7.8
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mLçift  destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
BICINE  Merck Kat No 1.01910

Cas No	150-25-4	N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine  N,N-bis(hydroxyethyl)aminoacetic acid
EINECS No	205-755-1
Formül	C6H13NO4
Molar ağırlık	163.17 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; etanol, kloroform ve eterde az çözünür.
pKα	8.35 (20°C)
d pKα/dT	-0.018/°C
Uygulama notları	BICINE çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Biyolojik uygulamalarda düşük sıcaklıkta kullanılır. +2 yüklü metal iyonlarının varlığında şelatlaştırıcı ajan olarak davranır (Cu+2 >Ca+2>>Mg+2). Lowry yöntemiyle protein analizinde girişim yaptığı tespit edilmiştir.
Tampon aralığı	pH 7.6-9.0
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
BIS-TRIS  Merck Kat No 1.03252

Cas No	6976-37-0	2,2-Bis-(hydroxyethyl)-iminotris(hydroxymethyl) methane  2,2-Bis(hydroxymethyl)-2,2',2''-nitrilotriethanol
EINECS No	230-237-7
Formül	C8H19NO5
Molar ağırlık	209.24 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür.
pKα	6.46 (25°C)
d pKα/dT	-0.02/°C
Uygulama notları	Tris tamponları gibi Bis-Tris de sıcaklığa bağımlılık gösterir. İzoelektrik odaklamada ve 2 boyutlu elektroforezde katodik tampon olarak kullanılır.
Tampon aralığı	pH 5.8-7.3
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Genellikle beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 10 g madde 100 mL karbondioksidi uçurulmuş saf  suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
CHES  Merck Kat No 1.15229

Cas No	103-47-9	2-(Cyclohexylamino)ethane-sulfonic acid
EINECS No	203-115-6
Formül	C8H17NO3S
Molar ağırlık	207.29 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	9.55 (20°C)
d pKα/dT	-0.018/°C
Uygulama notları	CHES 260 ve 280 nm'de düşük absorpsiyon gösterir.
Tampon aralığı	pH 8.6-10.0
Çalışma aralığı	10-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
Glycylglycine  Merck Kat No 1.04233

Cas No	556-50-3
EINECS No	209-127-8
Formül	C4H8N2O3
Molar ağırlık	132.12 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; etanolde az çözünür, eterde çözünmez
pKα1	3.14 (25°C)
pKα2	8.4(20oC)
d pKα/dT	-0.028/°C
Uygulama notları	Sıcaklığa bağımlıdır.
Tampon aralığı	pH 7.5-8.9
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
HEPES  Merck Kat No 1.10110 (tampon maddesi), 1.17839 (biyoteknoloji için)

Cas No	7365-45-9	2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine]ethanesulfonic acid
EINECS No	230-907-9
Formül	C8H18N2O4S
Molar ağırlık	238.30 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	7.55 (20°C)
d pKα/dT	-0.014/°C
Uygulama notları	HEPES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Protein çözeltilerinin dondurulmasında kullanılır. Birçok tamponda gözlenen donma sonucundaki asitlik artışı, HEPES tamponu varlığında ihmal edilebilir düzeye iner. HEPES, dondurarak kurutma ve sonrasındaki depolama süresince enzim ve koenzimleri denaturasyon ve inaktivasyondan korur. HEPES hücre kültür ortamlarında yaygın olarak kullanılır. Bununla birlikte, belirli hücre hatlarının gelişimini teşvik ettiği de belirtilmiştir. Tris tamponlarıyla karşılaştırıldıklarında HEPES'in sıcaklılığa bağımlılığı daha düşük düzeydedir. Bu tampon iki değerlikli metal iyonlarıyla kompleks oluşturmaz, bazı durumlarda belirli enzimler için kofaktör veya aktivatör olarak etki eder (örneğin; Benzonaz için Mg2+). HEPES UV bölgede düşük absorbans gösterirken, Lowry protein yönteminde girişim yaptığından hatalı pozitif sonuç verebilir. HEPES tamponları, eşmolar HEPES ve HEPES-Na çözeltilerinin karıştırılmasıyla hazırlanabilir.
Tampon aralığı	pH 6.5-8.5
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL karbondioksiti uzaklaştırılmış destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
HEPES-Na  Merck Kat No 1.15231

Cas No	75277-39-3	2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine] ethanesulfonic acid sodiumsalt
EINECS No	278-169-7
Formül	C8H17N2NaO4S
Molar ağırlık	260.28 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	7.55 (20°C)
d pKα/dT	-0.014/°C
Uygulama notları	HEPES in uygulamaları ile aynıdır.
Tampon aralığı	pH 6.5-8.5
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 1.0 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
HEPPS  Merck Kat No 1.15230

Cas No	16052-06-5	N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N'-3-propanesulfonic acid
EINECS No	240-198-8
Formül	C9H20N2O4S
Molar ağırlık	252.33 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	8.00 (20°C)
d pKα/dT	-0.014/°C
Uygulama notları	HEPPS, uygulama alanı olarak HEPES' e benzer. +2 değerlikli katyonları bağlamaz. Follin yöntemi ile protein tayininde girişim yapabilir.
Tampon aralığı	pH 7.3-8.7
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 1 g madde 50 mL çift  destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
MES  Merck Kat No 1.06126

Cas No	145224-94-8	2-(N-Morpholino)ethane-sulfonic acid  4-Morpholinoethanesulfonic acid
EINECS No	224-632-3
Formül	C6H13NO4S.H2O
Molar ağırlık	213.25 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	6.15 (20°C)
d pKα/dT	-0.011/°C
Uygulama notları	MES çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Bu tampon mikroorganizmalar, bitki  hücreleri ve alglerin geliştirilmesi amacıyla hazırlanan besiyerlerinde kullanılır. Biyolojik olarak inert olduğundan dolayı belirtilen  pH aralığında kullanılması uygun bir tampondur. Diğer good tamponları ile karşılaştırıldığında  minimum selatlaştırma özelliğine sahiptir. Glukoz varlığında otoklavlandığında kısmı olarak bozunabilir.
Tampon aralığı	pH 5.6-6.7
Çalışma aralığı	10-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 MOPS  Merck Kat No 1.06129

Cas No	1132-61-2	3-(N-Morpholino)propane sulfonic acid  3-Morpholinopropanesulfonic acid
EINECS No	214-478-5
Formül	C7H15NO4S
Molar ağırlık	209.26 g/mol
Çözünürlük	Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	7.20 (20°C)
d pKα/dT	-0.013/°C
Uygulama notları	MOPS çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. İzoelektrik odaklama ve protein tayini gibi bir çok uygulamada ve fermantasyon ortamının hazırlanmasında kullanılır. Metal bağlama kapasitesi ihmal edilebilir düzeydedir.
Tampon aralığı	pH 6.5-7.9
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
PIPES  Merck Kat No 1.10220

Cas No	5625-37-6	1,4-Piperazinebis(ethanesulfonic acid)
EINECS No	227-05-76
Formül	C8H18N2O6S2
Molar ağırlık	302.36 g/mol
Çözünürlük	Suda yavaş çözünür; alkalilerde çözülür; toluen ve eterde çözünmez
pKα	6.80 (20°C)
d pKα/dT	-0.0085/°C
Uygulama notları	PIPES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Lowry metodu ile protein tayininde girişim yapar.
Tampon aralığı	pH 6.1-7.5
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Açık sarı-beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 0.2 g madde 10 mL 0.1 M NaOH içerisinde  çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
TES  Merck Kat No 1.10695

Cas No	7365-44-8	3-[Tris(hydroxymethyl)methylamino]-1-ethanesulfonic acid
EINECS No	230-906-3
Formül	C6H15NO6S
Molar ağırlık	229.25 g/mol
Çözünürlük	Suda  çözünür;  toluen ve eterde çözünmez.
pKα	7.50 (20°C)
d pKα/dT	-0.02/°C
Uygulama notları	TES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir.
Tampon aralığı	pH 6.8-8.2
Çalışma aralığı	20-100mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift  destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
TRICINE  Merck Kat No 1.08602

Cas No	5704-04-1	N-(2-Hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)glycine  N-[Tris(hydroxymethyl)-methyl]-glycine  N-[2-hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)-ethyl]glycine
EINECS No	227-193-6
Formül	C6H13NO5
Molar ağırlık	179.17 g/mol
Çözünürlük	Suda  çözünür;  toluen ve eterde çözünmez.
pKα	8.15 (20°C)
d pKα/dT	-0.021/°C
Uygulama notları	TRICINE, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Özellik bakımından BICINE benzer. Bir çok sistemde TRIS ile yer değiştirebilir.SDS jel elektroforezinde ve izoelektrik fokuslamada tampon olarak kullanılır.
Tampon aralığı	pH 7.2-9.2
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
 
TRIS  Merck Kat No 1.08382

Cas No	77-86-1	Tris(hydroxymethyl)aminomethane
EINECS No	201-06-44
Formül	C4H11NO3
Molar ağırlık	121.14 g/mol
Çözünürlük	Suda  çözünür;  metanol ve etanol de yavaş çözünür.
pKα	8.30 (20°C)
d pKα/dT	-0.028/°C
Uygulama notları	TRİS ucuz bir kimyasaldır. Düşük UV absorbansına sahip olması nedeni ile denemelerde sıklıkla kullanılır. pH 7.5'un  üzerinde NADH ve NADPH, TRİS tamponunda fosfat tamponuna göre daha stabildir. Tris, kalsiyum ve mangan  tuzlarını çöktürmez. Bununla birlikte bir takım dezavantajları bulunmaktadır. Örneğin bu tamponlar sıcaklığa karşı yüksek düzeyde duyarlılık gösterirler. Yapısında primer amin bulunduğu için reaktif bir bileşiktir ve bu nedenle bazı reaksiyonlarda girişim yapabilir (proteinlerin immobilizasyonunda). Biyolojik membranlardan geçebilir. Havadaki CO2 'i absorbe eder. Yapısındaki primer amin nedeni ile Bradford metodu ile protein tayininde girişim yapar.
Tampon aralığı	pH 7.2-9.0
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Beyaz kristal toz
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL karbondioksiti uzaklaştırılırmış destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.

 
TRIS HCL  Merck Kat No 1.08219

Cas No	1185-53-1	Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride
EINECS No	214-684-5
Formül	C4H11NO5.HCl
Molar ağırlık	157.60 g/mol
Çözünürlük	Suda  çözünür.
pKα	8.30 (20°C)
d pKα/dT	-0.028/°C
Uygulama notları	TRIS ile aynıdır
Tampon aralığı	pH 7.2-9.0
Çalışma aralığı	20-200mM
Görüntüsü	Açık sarı beyazımsı toz kristal
Test çözeltisi	Hassas tartılmış 5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır.