Tampon Çözelti Hazırlanması
Gösterilen Sayfa 12 / 12
05. Biyolojik Tampon Çözeltileri
Çift yüklü tamponların, biyolojik moleküllerle uyumu, Good ve arkadaşları tarafından çeşitli çalışmalarla kanıtlanmıştır.'Good' tampon çözeltilerinin, fosfat-, tris-, borat- ve karbonat- tamponlarına göre avantajları fazladır. Bu avantajlar;
- pKα değerlerinin pH 6.0 ve 9.0 arasında olması,
- pKα değerlerinin sıcaklık ve derişimden bağımsız olmasıdır.
Bütün bu bileşikler kimyasal olarak kararlıdır, toksik değildir ve biyokimyasal reaksiyonlarda girişim yapmazlar. Hücre membranından absorbe edilmediğinden dolayı hücre gelişimi amacıyla kullanıma uygundur. Aynı zamanda 240-700 nm dalgaboyu arasındaki absorpsiyonu da minimum düzeydedir.
05.01. Tampon Çözelti Hazırlarken Dikkat Edilecek Kurallar
Bir tampon çözeltinin yaklaşık %99'unu su oluşturmaktadır. Bu nedenle kullanılan suyun kalitesi ve güvenilirliği çok önemlidir. Kullanılacak suyun çift destile olması ve kullanılmadan önce ultrafiltre edilmesi tavsiye edilir.
Deney sırasında kullanılacak olan tampon çözeltinin sıcaklığı ve konsantrasyonu not edilmeli, daha sonraki denemelerde de aynı parametrelerin geçerli olduğundan emin olunmalı. Stok çözelti ile çalışırken, mutlaka çözelti seyreltildikten ve sıcaklık ayarlaması yapıldıktan sonra pH'sı ayarlanmadır. Stok çözeltilerde gözle görülebilen bir bulanıklık olup oladığına dikkat edilmelidir. Bu bulanıklık bir mikrobiyal kontaminasyon veya ortamdaki tuzların çökmesi sonucunda oluşabilir. Çözeltiler serin bir yerde ve ağzı sıkıca kapatılarak muhafaza edilmelidir.
Seçilecek tamponun pKα değeri çalışma pH değerine yakın olmalıdır. Deney süresince pH nın düşeceği düşünülüyorsa pKα değeri çalışma pH değerinin çok az altında olan bir tampon seçilmedir. pH nın artacağı düşünülüyorsa bu sefer tam tersi durum söz konusudur (tamponun pKα sı çalışma pH değerinin biraz üzerinde).
Bazı durumlarda biyolojik sistemler üzerine, örneğin sodyum yada potasyum iyonlarının etkisini kontrol etmek için mineral katyonları içermeyen tamponların hazırlanması gerekli olabilir. Bu durumda pH değerinin ayarlanmasında NaOH veya KOH yerine quarterner organik tetrametilamonyum hidroksit çözeltisi kullanılabilir.
Fosfat Tamponları
Fosfat tamponu ideal bir tampon olup bir çok uygulamada kullanılmaktadır. Ancak aktif bir bileşen olduğu için birçok biyolojik reaksiyonlarda inhibitör, metabolit, aktivatör olarak etki etmesi olumsuzluk yaratır. Çok değerlikli katyonları bağlar veya çöktürür. Tamponlama kapasitesi, literatürde bir çok çalışmada pH 5.8-8.0 aralığında gösterilmesine karşın, pH 7.5'un altında zayıftır (Sørensen, S.P.L.: Biochem Z. 21, 131 (1909) and Biochem. Z. 22, 352 (1909)).
05.02. Good Tampon Kimyasalları
ACES Merck Kat No 1.15226
Cas No | 7365-82-4 | N-(2-Acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid |
EINECS No | 230-908-4 | |
Formül | C4H10N2O4S | |
Molar ağırlık | 182.20 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez. | |
pKα | 6.90 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.02/°C | |
Uygulama notları | ACES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. 260 ve 280 nm de düşük UV absorbansına sahiptir. Proteinlerin kromatografik saflaştırmasında elüsyon tamponu olarak kullanılır. Cu+2 metalini bağlar. Mg+2,Ca+2 ve Mn+2 metalini bağlamaz. | |
Tampon aralığı | pH 6.1-7.6 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2 g madde 50 mL iki kere destile edilmiş saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
ADA Merck Kat No 1.15227
Cas No | 26239-55-4 | N-(2-Acetamido)iminodiacetic acid |
EINECS No | 247-530-0 | |
Formül | C6H10N2O5 | |
Molar ağırlık | 190.16 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 6.60 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.011/°C | |
Uygulama notları | ADA, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir.Biyolojik uygulamalarda minimum girişim gösterir fakat metal iyonlarını bağlama kapasitesine sahiptir. | |
Tampon aralığı | pH 5.9-7.3 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 0.5 g madde 100 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
BES Merck Kat No 1.15228
Cas No | 10191-18-1 | N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethane sulfonic acid |
EINECS No | 233-465-5 | |
Formül | C6H15NO5S | |
Molar ağırlık | 213.25 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 7.15 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.016/°C | |
Uygulama notları | BES 260 ve 280 nm'de düşük absorpsiyon gösterir. Sadece Cu+2 katyonunu bağlar, Mg+2,Ca+2 ve Mn+2 katyonlarını bağlamaz. | |
Tampon aralığı | pH 6.4-7.8 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mLçift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
BICINE Merck Kat No 1.01910
Cas No | 150-25-4 | N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine N,N-bis(hydroxyethyl)aminoacetic acid |
EINECS No | 205-755-1 | |
Formül | C6H13NO4 | |
Molar ağırlık | 163.17 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; etanol, kloroform ve eterde az çözünür. | |
pKα | 8.35 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.018/°C | |
Uygulama notları | BICINE çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Biyolojik uygulamalarda düşük sıcaklıkta kullanılır. +2 yüklü metal iyonlarının varlığında şelatlaştırıcı ajan olarak davranır (Cu+2 >Ca+2>>Mg+2). Lowry yöntemiyle protein analizinde girişim yaptığı tespit edilmiştir. | |
Tampon aralığı | pH 7.6-9.0 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
BIS-TRIS Merck Kat No 1.03252
Cas No | 6976-37-0 | 2,2-Bis-(hydroxyethyl)-iminotris(hydroxymethyl) methane 2,2-Bis(hydroxymethyl)-2,2',2''-nitrilotriethanol |
EINECS No | 230-237-7 | |
Formül | C8H19NO5 | |
Molar ağırlık | 209.24 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür. | |
pKα | 6.46 (25°C) | |
d pKα/dT | -0.02/°C | |
Uygulama notları | Tris tamponları gibi Bis-Tris de sıcaklığa bağımlılık gösterir. İzoelektrik odaklamada ve 2 boyutlu elektroforezde katodik tampon olarak kullanılır. | |
Tampon aralığı | pH 5.8-7.3 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Genellikle beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 10 g madde 100 mL karbondioksidi uçurulmuş saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
CHES Merck Kat No 1.15229
Cas No | 103-47-9 | 2-(Cyclohexylamino)ethane-sulfonic acid |
EINECS No | 203-115-6 | |
Formül | C8H17NO3S | |
Molar ağırlık | 207.29 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 9.55 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.018/°C | |
Uygulama notları | CHES 260 ve 280 nm'de düşük absorpsiyon gösterir. | |
Tampon aralığı | pH 8.6-10.0 | |
Çalışma aralığı | 10-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
Glycylglycine Merck Kat No 1.04233
Cas No | 556-50-3 | |
EINECS No | 209-127-8 | |
Formül | C4H8N2O3 | |
Molar ağırlık | 132.12 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; etanolde az çözünür, eterde çözünmez | |
pKα1 | 3.14 (25°C) | |
pKα2 | 8.4(20oC) | |
d pKα/dT | -0.028/°C | |
Uygulama notları | Sıcaklığa bağımlıdır. | |
Tampon aralığı | pH 7.5-8.9 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
HEPES Merck Kat No 1.10110 (tampon maddesi), 1.17839 (biyoteknoloji için)
Cas No | 7365-45-9 | 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine]ethanesulfonic acid |
EINECS No | 230-907-9 | |
Formül | C8H18N2O4S | |
Molar ağırlık | 238.30 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 7.55 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.014/°C | |
Uygulama notları | HEPES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Protein çözeltilerinin dondurulmasında kullanılır. Birçok tamponda gözlenen donma sonucundaki asitlik artışı, HEPES tamponu varlığında ihmal edilebilir düzeye iner. HEPES, dondurarak kurutma ve sonrasındaki depolama süresince enzim ve koenzimleri denaturasyon ve inaktivasyondan korur. HEPES hücre kültür ortamlarında yaygın olarak kullanılır. Bununla birlikte, belirli hücre hatlarının gelişimini teşvik ettiği de belirtilmiştir. Tris tamponlarıyla karşılaştırıldıklarında HEPES'in sıcaklılığa bağımlılığı daha düşük düzeydedir. Bu tampon iki değerlikli metal iyonlarıyla kompleks oluşturmaz, bazı durumlarda belirli enzimler için kofaktör veya aktivatör olarak etki eder (örneğin; Benzonaz için Mg2+). HEPES UV bölgede düşük absorbans gösterirken, Lowry protein yönteminde girişim yaptığından hatalı pozitif sonuç verebilir. HEPES tamponları, eşmolar HEPES ve HEPES-Na çözeltilerinin karıştırılmasıyla hazırlanabilir. | |
Tampon aralığı | pH 6.5-8.5 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL karbondioksiti uzaklaştırılmış destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
HEPES-Na Merck Kat No 1.15231
Cas No | 75277-39-3 | 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine] ethanesulfonic acid sodiumsalt |
EINECS No | 278-169-7 | |
Formül | C8H17N2NaO4S | |
Molar ağırlık | 260.28 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 7.55 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.014/°C | |
Uygulama notları | HEPES in uygulamaları ile aynıdır. | |
Tampon aralığı | pH 6.5-8.5 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 1.0 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
HEPPS Merck Kat No 1.15230
Cas No | 16052-06-5 | N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N'-3-propanesulfonic acid |
EINECS No | 240-198-8 | |
Formül | C9H20N2O4S | |
Molar ağırlık | 252.33 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 8.00 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.014/°C | |
Uygulama notları | HEPPS, uygulama alanı olarak HEPES' e benzer. +2 değerlikli katyonları bağlamaz. Follin yöntemi ile protein tayininde girişim yapabilir. | |
Tampon aralığı | pH 7.3-8.7 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 1 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
MES Merck Kat No 1.06126
Cas No | 145224-94-8 | 2-(N-Morpholino)ethane-sulfonic acid 4-Morpholinoethanesulfonic acid |
EINECS No | 224-632-3 | |
Formül | C6H13NO4S.H2O | |
Molar ağırlık | 213.25 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 6.15 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.011/°C | |
Uygulama notları | MES çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Bu tampon mikroorganizmalar, bitki hücreleri ve alglerin geliştirilmesi amacıyla hazırlanan besiyerlerinde kullanılır. Biyolojik olarak inert olduğundan dolayı belirtilen pH aralığında kullanılması uygun bir tampondur. Diğer good tamponları ile karşılaştırıldığında minimum selatlaştırma özelliğine sahiptir. Glukoz varlığında otoklavlandığında kısmı olarak bozunabilir. | |
Tampon aralığı | pH 5.6-6.7 | |
Çalışma aralığı | 10-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
MOPS Merck Kat No 1.06129
Cas No | 1132-61-2 | 3-(N-Morpholino)propane sulfonic acid 3-Morpholinopropanesulfonic acid |
EINECS No | 214-478-5 | |
Formül | C7H15NO4S | |
Molar ağırlık | 209.26 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 7.20 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.013/°C | |
Uygulama notları | MOPS çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. İzoelektrik odaklama ve protein tayini gibi bir çok uygulamada ve fermantasyon ortamının hazırlanmasında kullanılır. Metal bağlama kapasitesi ihmal edilebilir düzeydedir. | |
Tampon aralığı | pH 6.5-7.9 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
PIPES Merck Kat No 1.10220
Cas No | 5625-37-6 | 1,4-Piperazinebis(ethanesulfonic acid) |
EINECS No | 227-05-76 | |
Formül | C8H18N2O6S2 | |
Molar ağırlık | 302.36 g/mol | |
Çözünürlük | Suda yavaş çözünür; alkalilerde çözülür; toluen ve eterde çözünmez | |
pKα | 6.80 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.0085/°C | |
Uygulama notları | PIPES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Lowry metodu ile protein tayininde girişim yapar. | |
Tampon aralığı | pH 6.1-7.5 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Açık sarı-beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 0.2 g madde 10 mL 0.1 M NaOH içerisinde çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
TES Merck Kat No 1.10695
Cas No | 7365-44-8 | 3-[Tris(hydroxymethyl)methylamino]-1-ethanesulfonic acid |
EINECS No | 230-906-3 | |
Formül | C6H15NO6S | |
Molar ağırlık | 229.25 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez. | |
pKα | 7.50 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.02/°C | |
Uygulama notları | TES, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. | |
Tampon aralığı | pH 6.8-8.2 | |
Çalışma aralığı | 20-100mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
TRICINE Merck Kat No 1.08602
Cas No | 5704-04-1 | N-(2-Hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)glycine N-[Tris(hydroxymethyl)-methyl]-glycine N-[2-hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)-ethyl]glycine |
EINECS No | 227-193-6 | |
Formül | C6H13NO5 | |
Molar ağırlık | 179.17 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; toluen ve eterde çözünmez. | |
pKα | 8.15 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.021/°C | |
Uygulama notları | TRICINE, çift yüklü ²Good² tampon grubuna dahildir. Özellik bakımından BICINE benzer. Bir çok sistemde TRIS ile yer değiştirebilir.SDS jel elektroforezinde ve izoelektrik fokuslamada tampon olarak kullanılır. | |
Tampon aralığı | pH 7.2-9.2 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
TRIS Merck Kat No 1.08382
Cas No | 77-86-1 | Tris(hydroxymethyl)aminomethane |
EINECS No | 201-06-44 | |
Formül | C4H11NO3 | |
Molar ağırlık | 121.14 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür; metanol ve etanol de yavaş çözünür. | |
pKα | 8.30 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.028/°C | |
Uygulama notları | TRİS ucuz bir kimyasaldır. Düşük UV absorbansına sahip olması nedeni ile denemelerde sıklıkla kullanılır. pH 7.5'un üzerinde NADH ve NADPH, TRİS tamponunda fosfat tamponuna göre daha stabildir. Tris, kalsiyum ve mangan tuzlarını çöktürmez. Bununla birlikte bir takım dezavantajları bulunmaktadır. Örneğin bu tamponlar sıcaklığa karşı yüksek düzeyde duyarlılık gösterirler. Yapısında primer amin bulunduğu için reaktif bir bileşiktir ve bu nedenle bazı reaksiyonlarda girişim yapabilir (proteinlerin immobilizasyonunda). Biyolojik membranlardan geçebilir. Havadaki CO2 'i absorbe eder. Yapısındaki primer amin nedeni ile Bradford metodu ile protein tayininde girişim yapar. | |
Tampon aralığı | pH 7.2-9.0 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Beyaz kristal toz | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 2.5 g madde 50 mL karbondioksiti uzaklaştırılırmış destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
TRIS HCL Merck Kat No 1.08219
Cas No | 1185-53-1 | Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride |
EINECS No | 214-684-5 | |
Formül | C4H11NO5.HCl | |
Molar ağırlık | 157.60 g/mol | |
Çözünürlük | Suda çözünür. | |
pKα | 8.30 (20°C) | |
d pKα/dT | -0.028/°C | |
Uygulama notları | TRIS ile aynıdır | |
Tampon aralığı | pH 7.2-9.0 | |
Çalışma aralığı | 20-200mM | |
Görüntüsü | Açık sarı beyazımsı toz kristal | |
Test çözeltisi | Hassas tartılmış 5 g madde 50 mL çift destile saf suda çözülür. Çözelti berrak ve renksiz olmalıdır. |
2 Yorum - Senin Görüşün Nedir?
asetat tamponu hazırladım 1000ml için 410 gr tartıp 500ml suda çözdüm daha sonra ph ı 4-5 e çekmek için 500 ml asetik asit ekledim. asetat tamponu sabah oldugunda kristal hale gelmişti sebebi nedir ?
Yani 61.6 ml çözelti H'dan alınarak (Na2B4O7) üzerine 38.4 ml çözelti A'dan (KH2PO4) eklenir.
Çözelti A mı Çözelti F mi? Çözelti A HCl çözelti F KH2PO4